ଡିଥିଓଥ୍ରେଇଟଲ୍ (DTT) ଏକ ସାଧାରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହ୍ରାସକାରୀ ଏଜେଣ୍ଟ, ଯାହାକୁ ନୂତନ ସବୁଜ ମିଶ୍ରଣ ଭାବରେ ମଧ୍ୟ ଜଣାଶୁଣା। ଏହା ଦୁଇଟି ମର୍କାପ୍ଟାନ୍ ଗୋଷ୍ଠୀ (-SH) ସହିତ ଏକ ଛୋଟ ଆଣବିକ ଜୈବ ଯୌଗିକ। ଏହାର ହ୍ରାସକାରୀ ଗୁଣ ଏବଂ ସ୍ଥିରତା ଯୋଗୁଁ, DTT ଜୈବ ରସାୟନ ଏବଂ ଆଣବିକ ଜୀବବିଜ୍ଞାନ ପରୀକ୍ଷଣରେ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ।
ଡିଟିଟିର ମୁଖ୍ୟ ଭୂମିକା ହେଉଛି ପ୍ରୋଟିନ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଜୈବ ଅଣୁରେ ଡାଇସଲଫାଇଡ୍ ବନ୍ଧନକୁ ହ୍ରାସ କରିବା। ଡାଇସଲଫାଇଡ୍ ବନ୍ଧନ ପ୍ରୋଟିନ ଫୋଲ୍ଡିଂ ଏବଂ ସ୍ଥିରତାର ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଅଂଶ, କିନ୍ତୁ କିଛି ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପରିସ୍ଥିତିରେ, ଯେପରିକି ହ୍ରାସଯୋଗ୍ୟ SDS-PAGE ବିଶ୍ଳେଷଣ, ପ୍ରୋଟିନ ପୁନଃସଂଯୋଗ ଏବଂ ଫୋଲ୍ଡିଂ, ପ୍ରୋଟିନର ସ୍ଥାନିୟ ଗଠନକୁ ଉନ୍ମୋଚନ କରିବା ପାଇଁ ଡାଇସଲଫାଇଡ୍ ବନ୍ଧନକୁ ଦୁଇଟି ଥିଓଲ୍ ଗୋଷ୍ଠୀକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ। ଡିଟିଟି ଡାଇସଲଫାଇଡ୍ ବନ୍ଧନ ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରି ସେମାନଙ୍କୁ ମର୍କାପ୍ଟାନ୍ ଗୋଷ୍ଠୀରେ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ, ଏହିପରି ପ୍ରୋଟିନର ସ୍ଥାନିୟ ଗଠନକୁ ଖୋଲିପାରେ ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବାକୁ ସହଜ କରିଥାଏ।
ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ସ୍ଥିରତାକୁ ସୁରକ୍ଷା ଦେବା ପାଇଁ ମଧ୍ୟ DTT ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ। କିଛି ଏନଜାଇମ-ଉତ୍ପ୍ରେରିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ, ଏନଜାଇମର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଦ୍ୱାରା ହ୍ରାସ ପାଇପାରେ। DTT ଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରି ସେମାନଙ୍କୁ କ୍ଷତିକାରକ ପଦାର୍ଥରେ ପରିଣତ କରିପାରିବ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା ଏନଜାଇମର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ସ୍ଥିରତାକୁ ସୁରକ୍ଷା ଦେଇଥାଏ।
β-mercaptoethanol (β-ME) ଭଳି ପାରମ୍ପରିକ ହ୍ରାସକାରୀ ଏଜେଣ୍ଟ ତୁଳନାରେ, DTT କୁ ଏକ ସୁରକ୍ଷିତ ଏବଂ ଅଧିକ ସ୍ଥିର ହ୍ରାସକାରୀ ଏଜେଣ୍ଟ ଭାବରେ ବିବେଚନା କରାଯାଏ। ଏହା କେବଳ ଜଳୀୟ ଦ୍ରବଣରେ ସ୍ଥିର ନୁହେଁ, ବରଂ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ ଏସିଡ୍-ବେସ୍ ଅବସ୍ଥାରେ ଏହାର ହ୍ରାସକାରୀ ଗୁଣକୁ ମଧ୍ୟ ବଜାୟ ରଖେ।
DTT ର ବ୍ୟବହାର ତୁଳନାତ୍ମକ ଭାବରେ ସହଜ। ସାଧାରଣତଃ, DTT କୁ ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ବଫରରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରାଯାଏ ଏବଂ ତାପରେ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରଣାଳୀରେ ଯୋଡାଯାଏ। DTT ର ସର୍ବୋତ୍ତମ ସାନ୍ଦ୍ରତା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପରୀକ୍ଷଣ ଅନୁସାରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ, ଏବଂ ସାଧାରଣତଃ 0.1-1mM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ। କମ ସାନ୍ଦ୍ରତା କୋଷ ବୃଦ୍ଧି ଉପରେ ପ୍ରତିକୂଳ ପ୍ରଭାବ ହ୍ରାସ କରିପାରେ ଏବଂ ଲକ୍ଷ୍ୟ ପ୍ରୋଟିନର ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରକାଶନ ଯୋଗୁଁ ସାଇଟୋଟକ୍ସିସିଟି ହ୍ରାସ କରିପାରେ। ଅଧିକ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଅତ୍ୟଧିକ କୋଷ ମେଟାବୋଲିକ୍ ବୋଝ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ, ଯାହା କୋଷ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ପ୍ରକାଶନ ଦକ୍ଷତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ।
ସର୍ବୋତ୍ତମ ସାନ୍ଦ୍ରତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାର ଉପାୟ ହେଉଛି ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ IPTG ଇଣ୍ଡେକ୍ସନ ପରୀକ୍ଷା କରି ଲକ୍ଷ୍ୟ ପ୍ରୋଟିନର ପ୍ରକାଶନ ସ୍ତର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା। କ୍ଷୁଦ୍ର-ସ୍ତରର ସଂସ୍କୃତି ପରୀକ୍ଷା ବିଭିନ୍ନ IPTG ସାନ୍ଦ୍ରତା (ଯଥା 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ଇତ୍ୟାଦି) ବ୍ୟବହାର କରି କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ପ୍ରକାଶନ ପ୍ରଭାବ ଲକ୍ଷ୍ୟ ପ୍ରୋଟିନର ପ୍ରକାଶନ ସ୍ତର ଚିହ୍ନଟ କରି ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇପାରିବ (ଯଥା ପଶ୍ଚିମ ବ୍ଲଟ୍ କିମ୍ବା ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଚିହ୍ନଟକରଣ)। ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳ ଅନୁସାରେ, ସର୍ବୋତ୍ତମ ପ୍ରକାଶନ ପ୍ରଭାବ ସହିତ ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଭାବରେ ଚୟନ କରାଯାଇଥିଲା।
ଏହା ସହିତ, ସମାନ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପରିସ୍ଥିତିରେ ସାଧାରଣତଃ ବ୍ୟବହୃତ IPTG ସାନ୍ଦ୍ରତା ପରିସରକୁ ବୁଝିବା ପାଇଁ ଆପଣ ପ୍ରାସଙ୍ଗିକ ସାହିତ୍ୟ କିମ୍ବା ଅନ୍ୟ ପରୀକ୍ଷାଗାରଗୁଡ଼ିକର ଅଭିଜ୍ଞତାକୁ ମଧ୍ୟ ଉଲ୍ଲେଖ କରିପାରିବେ, ଏବଂ ତା’ପରେ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଆବଶ୍ୟକତା ଅନୁଯାୟୀ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ଏବଂ ଆଡଜଷ୍ଟ କରିପାରିବେ।
ଏହା ମନେ ରଖିବା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଯେ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାଶନ ପ୍ରଣାଳୀ, ଲକ୍ଷ୍ୟ ପ୍ରୋଟିନ ଏବଂ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଅବସ୍ଥା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି ସର୍ବୋତ୍ତମ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଭିନ୍ନ ହୋଇପାରେ, ତେଣୁ ପ୍ରତ୍ୟେକ କ୍ଷେତ୍ର ଆଧାରରେ ଏହାକୁ ଅନୁକୂଳ କରିବା ସର୍ବୋତ୍ତମ।
ସଂକ୍ଷେପରେ, DTT ହେଉଛି ଏକ ସାଧାରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହ୍ରାସକାରୀ ଏଜେଣ୍ଟ ଯାହା ପ୍ରୋଟିନ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଜୈବ ଅଣୁରେ ଡାଇସଲଫାଇଡ୍ ବନ୍ଧନକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ଏବଂ ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ସ୍ଥିରତାକୁ ସୁରକ୍ଷା ଦେବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ। ଏହାକୁ ଜୈବ ରସାୟନ ଏବଂ ଆଣବିକ ଜୀବବିଜ୍ଞାନ ପରୀକ୍ଷଣରେ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଛି।
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ସେପ୍ଟେମ୍ବର-୨୮-୨୦୨୩